Microplásticos en el bulbo olfatorio del cerebro humano
Actualidad, Promoción y Prevención

Microplásticos en el bulbo olfatorio del cerebro humano

La presencia de microplásticos en el bulbo olfativo humano sugiere la vía olfativa como una posible ruta de entrada de microplásticos al cerebro, lo que resalta la necesidad de más investigaciones sobre sus efectos neurotóxicos y sus implicaciones para la salud humana.

Fuente: JAMA Network

Luis Fernando Amato-Lourenço, PhD1,2; Dra. Katia Cristina Dantas2; Gabriel Ribeiro Júnior, PhD2; y otrosDr. Vitor Ribeiro Paes2; Dr. Rómulo Augusto Ando4; Raúl de Oliveira Freitas, PhD3; Ohanna María Menezes M. da Costa, PhD3; Dra. Renata S. Rabelo3; Kelly Cristina Soares Bispo2; Regiani Carvalho-Oliveira, PhD2; Thais Mauad, doctora en medicina y doctora en filosofía2 / Afiliaciones de los autores Información del artículo – Abierto de red JAMA. 2024;7(9):e2440018. doi:10.1001/jamanetworkopen.2024.40018

Esta serie de casos analizó los bulbos olfatorios de 15 individuos fallecidos mediante espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier y detectó la presencia de microplásticos en los bulbos olfatorios de 8 individuos. Las formas predominantes fueron partículas y fibras, siendo el polipropileno el polímero más común.

Abstracto

Importancia.  La contaminación por microplásticos (MP) es un problema ambiental y de salud emergente. Si bien se han detectado MP en varios tejidos humanos, su presencia en el cerebro humano no ha sido documentada, lo que plantea importantes preguntas sobre los posibles efectos neurotóxicos y los mecanismos por los cuales los MP podrían llegar a los tejidos cerebrales.

Objetivo. Determinar la presencia de MPs en el bulbo olfatorio humano y analizar sus características como tamaño, morfología, color y composición polimérica.

Diseño, entorno y participantes.  Este estudio de serie de casos utilizó un diseño transversal que implicó el análisis de tejidos del bulbo olfatorio obtenidos de individuos fallecidos durante autopsias forenses de rutina. Los procedimientos de muestreo se llevaron a cabo en el Servicio de Verificación de Defunciones de la Ciudad de São Paulo, con análisis de laboratorio realizados en el Laboratorio Brasileño de Luz Sincrotrón (LNLS). Los participantes incluyeron 15 individuos adultos que habían sido residentes de São Paulo durante más de 5 años y se sometieron a autopsias forenses. Los criterios de exclusión incluyeron intervenciones neuroquirúrgicas previas. El análisis de datos se realizó en abril de 2024.

Exposición. La exposición primaria evaluada fue la presencia de MP en el bulbo olfatorio, analizada mediante examen directo del tejido y filtración del tejido digerido seguido de espectroscopia infrarroja por transformada de microFourier.

Principales resultados y medidas. Los principales resultados fueron la identificación y caracterización de las MP dentro del bulbo olfatorio, incluyendo su tamaño, morfología, color y composición polimérica.

Resultados: La edad media de los 15 individuos fallecidos fue de 69,5 años, con un rango de 33 a 100 años, con 12 hombres y 3 mujeres. Se detectaron MP en los bulbos olfatorios de 8 de los 15 individuos. Se identificaron un total de 16 partículas y fibras de polímeros sintéticos, con un 75% siendo partículas y un 25% siendo fibras. El polímero más común detectado fue polipropileno (43,8%). Los tamaños de MP variaron de 5,5 μm a 26,4 μm para partículas, y la longitud media de la fibra fue de 21,4 μm. Los materiales poliméricos estaban ausentes en los filtros de control negativo y en blanco de procedimiento, lo que indica un riesgo mínimo de contaminación.

Conclusiones y relevancia: Esta serie de casos aporta pruebas de la presencia de MP en el bulbo olfatorio humano, lo que sugiere una posible vía de translocación de MP al cerebro. Los hallazgos subrayan la necesidad de realizar más investigaciones sobre las implicaciones para la salud de la exposición a MP, en particular en lo que respecta a la neurotoxicidad y la posibilidad de que los MP eludan la barrera hematoencefálica.

Introducción

La ubicuidad de la contaminación por microplásticos (MP) se ha convertido en una preocupación ambiental generalizada, 1 que plantea preguntas sobre su presencia dentro del cuerpo humano y sus efectos nocivos. 2 Si bien se han detectado MP en varios órganos del cuerpo humano, como los pulmones, 3 , 4 intestinos grueso y delgado, 5 hígado, 6 placenta, 7 , 8 semen, 9 y torrente sanguíneo, 10 hasta donde sabemos, no ha habido estudios publicados hasta la fecha que informen sobre su presencia en el cerebro humano.

La presencia de la barrera hematoencefálica (BHE) es probablemente un factor limitante importante para el acceso de las MP al cerebro humano a través de la translocación hematógena. A pesar de esto, algunos estudios en animales han demostrado que las MP pueden dañar la BHE y llegar al cerebro a través de la ingestión oral, lo que lleva a efectos neurotóxicos. 11 – 13 Otro sitio de entrada potencial para los micro y nanoplásticos (MNP) en el cerebro humano es la vía olfativa. 14 Esta vía involucra neuronas olfativas en la nariz que transmiten información sobre los olores al sistema olfativo central del cerebro. Los axones olfativos pasan a través de la placa cribiforme (CP) del hueso etmoides y llegan a los bulbos olfatorios (BO), que están conectados al sistema límbico del cerebro.

Existen diferentes niveles de evidencia que sugieren que la vía olfativa podría permitir la translocación de partículas exógenas al cerebro. Se han detectado partículas ambientales de carbono negro en varias regiones del cerebro humano, y una de las concentraciones más altas se encontró en el OB, midiendo 420,8 partículas/mm3 . 15 En raras ocasiones, la forma ameboide de Naegleria fowleri, de 15 a 30 μm de tamaño, penetra en el cerebro a través de la nariz, causando meningoencefalitis amebiana. 16 Los individuos afectados suelen presentar la enfermedad después del contacto con cuerpos de agua dulce contaminados o después de enjuagarse la nariz con agua del grifo no esterilizada. 17 Además, se ha evocado la permeabilidad de esta barrera como una posible ruta de administración de fármacos más rápida y segura al cerebro, 18 , 19 así como el acceso al líquido cefalorraquídeo a través de los vasos linfáticos nasales. 20

En este estudio, dada la presencia ubicua de MP en el aire 21 y su identificación previa en la cavidad nasal humana, 22 , 23 planteamos la hipótesis de que la fracción de tamaño más pequeño de MP podría llegar al OB. Por lo tanto, realizamos una investigación sobre la presencia de MP dentro del OB humano obtenido de 15 individuos fallecidos durante autopsias forenses. Identificamos y analizamos varias características de las MP, incluido su tamaño, morfología, color y composición polimérica.

Métodos

Este estudio de serie de casos fue aprobado por el comité de ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de São Paulo, de conformidad con la Declaración de Helsinki. Los familiares de las personas fallecidas dieron su consentimiento informado por escrito. El estudio se llevó a cabo entre febrero de 2023 y mayo de 2024 y siguió las Directrices para la presentación de informes de series de casos . 46

Población de estudio

Obtuvimos los datos de los OB bilaterales de 15 individuos adultos que se sometieron a autopsias forenses de rutina en el Servicio de Verificación de Defunciones de la Ciudad de São Paulo de la Universidad de São Paulo para determinar la causa de la muerte. Todos los individuos habían sido residentes de São Paulo durante más de 5 años. No se seleccionaron para el estudio los casos en los que el fallecido se había sometido previamente a intervenciones neuroquirúrgicas. La información sobre ocupaciones anteriores y enfermedades subyacentes se obtuvo a través de cuestionarios administrados a los familiares más cercanos. Además, se revisaron los informes de autopsia. También recolectamos muestras del OB de 2 mortinatos a los 7 meses de gestación, como control negativo para el estudio. La recolección de OB se realizó entre febrero de 2023 y febrero de 2024.

Control de calidad y aseguramiento de la calidad y evaluación del procesamiento de muestras

Implementamos un enfoque libre de plástico para salvaguardar la integridad de nuestros resultados. Esta estrategia facilitó una evaluación exhaustiva de las posibles fuentes de variabilidad y error, mejorando así la confiabilidad de nuestros datos recopilados. Todos los procedimientos, desde el muestreo de OB hasta el análisis de espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (μFTIR), siguieron los protocolos recomendados por varios estudios. 24 – 26 Brevemente, todas las soluciones se prefiltraron a través de filtros de celulosa Whatman con un tamaño de malla de 0,45 μm. Los materiales de acero inoxidable, el material de vidrio y las muestras se cubrieron con papel de aluminio (antes y después del procesamiento) para evitar la contaminación de la muestra en el aire.

Se obtuvo agua ultrapura con una resistividad de 18,2 mΩ de un dispositivo de purificación Milli-Q (Millipore Corp). Los materiales de vidrio y acero inoxidable se lavaron a fondo utilizando el agua purificada 3 veces y luego utilizando acetona PA para eliminar cualquier partícula o fibra que se haya adherido al vidrio. El personal científico responsable del manejo de las muestras vestía exclusivamente batas de laboratorio 100% algodón y debía quitarse pulseras, anillos y relojes de plástico o textil para minimizar el riesgo de contaminación de las muestras. Se utilizaron guantes de látex limpios para todos los procedimientos. Las muestras se procesaron en una cabina de flujo laminar limpia (ISO clase 5, SKU330313, Hipperquímica, SP, Brasil).

Se utilizaron filtros en blanco (47 mm) de la colección de OB para el filtrado de la muestra para evaluar la posible contaminación del aire. También se utilizó un filtro limpio como control negativo. El acceso a la espectroscopia μFTIR y a la sala de digestión/filtración se limitó únicamente a los operadores, para evitar el flujo de aire en la sala y la suspensión/resuspensión de posibles contaminantes atmosféricos.

Procesamiento de muestras

La presencia de MP en el OB se evaluó de dos maneras: directamente en el tejido y mediante una evaluación digerida. El método de cortes criogénicos preserva el contexto espacial de las MP dentro del tejido, lo que permite observar su proximidad a estructuras anatómicas como los vasos sanguíneos. Esto es crucial para comprender las posibles vías de translocación y acumulación de MP dentro del OB. El método de digestión garantiza que no se pasen por alto las MP que están profundamente incrustadas en el tejido. Después de la digestión, las MP se concentran en filtros, que luego se pueden analizar para una cuantificación e identificación más precisas sin interferencias de la matriz tisular. Al combinar estos dos métodos, el estudio maximizó la probabilidad de detectar y caracterizar las MP dentro del OB.

Cortes criogénicos de OB

El OB izquierdo de cada caso se seccionó horizontalmente utilizando un criostato Leica CM1860 UV (Leica Biosystems) a 10 μm de espesor y se montó descongelado sobre sustratos de dióxido de silicio/silicio recubiertos con oro/cromo de 5 mm × 5 mm. No se utilizaron fijadores para las secciones de tejido. Luego, las muestras se liofilizaron durante 48 horas (Freezone 6 [Labconco Corp]) y se examinaron mediante microscopía óptica (Eclipse LV100ND [Nikon Instruments Inc]). El proceso de liofilización mantiene la integridad de los tejidos biológicos al extraer agua sin comprometer sustancialmente su estructura. Además, la presencia de moléculas de agua, caracterizadas por fuertes enlaces de hidrógeno, plantea un desafío considerable en las mediciones FTIR, ya que enmascaran señales específicas indicativas de composiciones químicas. 27

Los procedimientos ocurrieron en una sala de nivel de bioseguridad 2 en el Laboratorio de Preparaciones Criogénicas (LCRIO) del Laboratorio Brasileño de Luz Sincrotrón (LNLS), Centro Nacional de Investigaciones en Energía y Materiales (CNPEM).

Digestión y filtrado de muestras

Inmediatamente después de la toma de muestras, los OBs correctos de 10 casos seleccionados se congelaron individualmente a -20 °C en viales de vidrio, se cubrieron con papel de aluminio y se sellaron con una tapa de vidrio hasta la digestión. En 5 pacientes, no había tejido disponible para la digestión. Luego, los tejidos se incubaron durante 12 horas a 40 °C utilizando la mezcla de enzimas Corolase 7089 (20 UHb/mL) 4 dentro de la campana de flujo laminar.

La solución fue filtrada utilizando un sistema de filtración al vacío de vidrio (Sigma-Aldrich) y filtros de membrana de plata (25 mm de diámetro y 0,45 micras de tamaño de poro [Millipore]). Posteriormente, los filtros se mantuvieron individualmente en cajas Petri cerradas dentro de un disector de vidrio hasta el análisis espectroscópico. Debido a las características del material, no fue posible realizar una prueba de recuperación.

Espectroscopia infrarroja por transformada de microFourier

Realizamos mediciones de microespectroscopia μFTIR de un solo punto en modo de reflexión utilizando un microscopio IR limitado por difracción (Cary 620 [Agilent Technologies]). El microscopio IR está acoplado a un interferómetro Michelson responsable de la demultiplexación de frecuencia de la respuesta de banda ancha de infrarrojo medio. Utilizamos una fuente Globar de 1000 K y la iluminación y la detección de interferogramas se realizó utilizando un telururo de mercurio-cadmio crioenfriado de alta sensibilidad (MCT [Infrared Associates Inc]).

Después del interferómetro, el haz IR se dirigió a un objetivo de 25 × que produjo un punto de iluminación de 420 μm × 420 μm en la superficie de la muestra. Este campo de visión se redujo aún más a 50 a 100 μm mediante rendijas para concentrar el análisis alrededor de partículas específicas. La luz reflejada se recolectó a través de un arreglo confocal por la misma lente del objetivo y luego se dirigió al detector MCT. Los espectros FTIR se generaron calculando las transformadas de Fourier de los interferogramas registrados. La resolución espectral se configuró en 16 cm −1 , abarcando el rango de 4000 a 700 cm −1 . Cada espectro μFTIR se normalizó al espectro de una superficie de oro limpia, que sirvió como fondo de referencia. Los cortes criogénicos y los filtros digeridos se analizaron por completo. Los análisis μFTIR se llevaron a cabo en la línea de luz IMBUIA en el Laboratorio de Luz Sincrotrón de Brasil (LNLS), Centro Nacional de Investigación en Energía y Materiales (CNPEM).

Los espectros adquiridos se procesaron manualmente utilizando el sistema informático KnowItAll 2024 (John Wiley and Sons Inc). El análisis comparativo se realizó con la ayuda de bibliotecas de espectros FTIR desarrolladas para la investigación de MPs, incluida la biblioteca FTIR de partículas plásticas (FLOPP), 28 la biblioteca FTIR de partículas plásticas obtenidas del medio ambiente (FLOPP-e), 28 la base de datos siMPLe, 29 y la biblioteca espectral IR KnowItAll. Adoptamos un índice de calidad de coincidencia superior al 75 % de concordancia entre las bandas características de los polímeros observados en los materiales de referencia y las bandas observadas en partículas o fibras desconocidas. 30 , 31

Análisis de microfotografías

Determinamos los tamaños de partículas mediante el análisis de microfotografías obtenidas mediante espectroscopia μFTIR. Para realizar mediciones precisas se utilizó el software ImageJ 1.54g (Institutos Nacionales de Salud de EE. UU.)

Análisis estadístico

Los análisis descriptivos se realizaron con el software SPSS Statistics 26.0 (IBM Inc.). Estos análisis se realizaron en abril de 2024.

Resultados

La mediana (rango) de edad de los 15 individuos fallecidos fue de 69,5 (33-100) años. Incluían 12 hombres y 3 mujeres. La información demográfica se detalla en la Tabla 1. Aparte de los 2 casos con evidencia histológica de infarto cerebral isquémico previo y 1 caso con un hematoma subaracnoideo debido a un aneurisma roto de la arteria cerebral media, no hubo anormalidades histológicas cerebrales en los casos restantes. La masa media (DE) del OB (izquierdo o derecho) fue de 0,187 (0,050) g, con un rango de 0,100 a 0,273 g.

En 8 de los 15 individuos fallecidos se identificaron un total de 16 partículas y fibras de polímeros sintéticos, con un rango de 1 a 4 MP por OB. De estas, el 75% eran partículas, de las cuales el 83,4% eran fragmentos y el 16,6% eran esferas, mientras que el 25% eran fibras con una relación longitud-ancho superior a 3. Las partículas tenían una longitud media (DE) de 12,1 (7,2) μm, que oscilaba entre 5,5 y 26,4 μm, y una anchura media (DE) de 8,9 (6,4) μm, que oscilaba entre 3,0 y 25,4 μm. Las fibras exhibieron una longitud media (DE) de 21,4 (2,6) μm, que oscilaba entre 19,0 y 24,5 μm, y un ancho medio (DE) de 3,8 (1,8) μm, que oscilaba entre 3,0 y 6,0 μm.

En los filtros de procedimiento en blanco, detectamos 2 fibras de algodón, 2 perlas de sílice y 1 fragmento de silicato. No se encontraron materiales poliméricos en los filtros de procedimiento en blanco ni en los filtros de control negativo. De las 2 muestras recolectadas en mortinatos, pudimos analizar 1 caso, que no mostró la presencia de MP. El otro caso no tenía suficiente material para el análisis.

El polipropileno fue el polímero más frecuente (43,8 %), seguido de la poliamida, el nailon y el acetato de vinilo de polietileno (12,5 %). A este le siguieron el polietileno, la poliamida de perlón y el polipropileno de lana, que representaron el 6,3 %. Al compararlas con la biblioteca espectral de referencia de materiales plásticos, las partículas y fibras de MP identificadas exhibieron indicios de erosión. Los espectros μFTIR de las MP erosionadas diferían sustancialmente de los de las muestras estándar prístinas; múltiples picos en los espectros de las MP erosionadas estaban atenuados o totalmente ausentes.

Las microfotografías y los espectros puntuales μFTIR que muestran los principales tipos de MP detectados en el OB se muestran en la Figura 1 y la Figura 2. Los resultados completos de los espectros puntuales μFTIR del OB digerido se presentan en la eFigure del Suplemento 1. La Tabla 2 proporciona detalles sobre la morfología, el color y la caracterización química de las partículas y fibras.

Discusión

Hasta donde sabemos, este es el primer estudio en el que se identificó y caracterizó la presencia de MP en el cerebro humano mediante μFTIR, lo que permitió la cuantificación y caracterización de la morfología y la matriz polimérica. En concreto, detectamos partículas como la forma predominante en el OB en 8 de 15 individuos que se sometieron a autopsia en Sao Paulo. Nuestros datos amplían la noción de que no solo el carbono negro 15 sino también las MP se acumulan en el OB en humanos.

Creemos que la anatomía de la lámina cribiforme del hueso etmoides puede servir como puerta de entrada a los conductos nasales desde el interior del cráneo. Esta lámina, situada entre los huesos frontal y esfenoides, se encuentra horizontalmente y contiene múltiples agujeros, cada uno de menos de 1 mm de diámetro. 32 El OB se encuentra directamente encima de ella, y las neuronas olfatorias de la mucosa nasal llegan al OB a través de los agujeros de la lámina cribiforme. Estudios recientes han demostrado que parte del flujo de salida del líquido cefalorraquídeo se produce a través de los vasos linfáticos que rodean los axones olfatorios, llegando a la mucosa nasal y extendiéndose hacia el tejido linfoide nasal. 33 La osificación del CP se produce al año de edad, 34 y el área total de las perforaciones depende de la edad; es de 3,79 a 3,99 mm 2 en los mayores de 50 años y de 5,61 a 7,91 mm 2 en los menores de 50 años. Se cree que esta disminución del área a lo largo del tiempo, que causa compresión y disfunción de los nervios olfativos, explica la disminución de la sensación olfativa en individuos mayores. 35 Además, en ratones, los espacios paracelulares en el epitelio olfativo pueden alcanzar de 5 a 20 μm en la dimensión medial-lateral del transporte y un rango de 10 a 100 μm observado en la dimensión rostral-caudal. 36 Si se observa una situación similar en humanos, esto podría representar otro factor que facilita la entrada de partículas más grandes en el cerebro a través de la placa cribiforme.

Dada la presencia generalizada de MP en el aire, algunas de las cuales están asociadas con PM 2.5 , 37 la identificación de MP en la nariz 45 y ahora en el OB, junto con las vías anatómicas vulnerables, refuerza la noción de que la vía olfativa es un sitio de entrada importante para partículas exógenas al cerebro. En estudios epidemiológicos previos, la exposición a PM 2.5 se ha asociado con resultados adversos neurológicos y psiquiátricos, como la demencia. 38 , 39 Algunas enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Parkinson, parecen tener una conexión con anomalías nasales como síntomas iniciales. 40 En estudios experimentales, tanto la exposición a PM 2.5 como a MP han demostrado causar varios efectos neurotóxicos, incluyendo alteraciones en el desarrollo cerebral. 41 , 42 La placa cribiforme alcanza la maduración a los 1 a 2 años de edad, que es una ventana de tiempo crítica durante la cual la penetración de MP en el cerebro podría tener efectos negativos en la maduración del órgano.

En este estudio, la matriz polimérica de MP encontrada en el OB corresponde a los plásticos más producidos y manufacturados, como polipropileno, nylon/poliamida, polietileno y acetato de vinilo de polietileno, presentes en envases, ropa y accesorios del hogar, sugiriendo los ambientes interiores como una fuente importante de MP inhalados. 21 , 43

Limitaciones

Este estudio tiene ciertas limitaciones. Aunque la vía olfativa parece una ruta de exposición probable, no podemos descartar la posibilidad de múltiples rutas de entrada. Las MP podrían haber llegado al OB a través de la circulación sistémica, cruzando la BHE, o por la vía respiratoria a través del nervio trigémino. 44 La matriz biológica de los tejidos del OB puede ser un factor de confusión al analizar los espectros de MP debido a su similitud con algunos materiales poliméricos. Por lo tanto, fuimos cautelosos al considerar partículas sospechosas como material polimérico solo cuando las bandas espectrales coincidían altamente con las bandas meteorizadas de las bibliotecas de MP (HQI >75%). En las muestras filtradas, la matriz biológica se digirió previamente, lo que no fue un problema. Dada la resolución espacial máxima (3 μm) de la configuración de espectroscopia μFTIR y la capacidad limitada de análisis para otras técnicas, no pudimos detectar nanoplásticos. Es probable que la cantidad de plásticos en el rango submicrónico con el potencial de causar un daño biológico sustancial sea mucho mayor.

Evitar la contaminación es uno de los mayores retos al analizar MP. Debido a la presencia de fibras y partículas de MP en el aire, hemos utilizado muestras en blanco en todos los procedimientos metodológicos para detectar la contaminación del aire. No encontramos MP en nuestros blancos de procedimiento, lo que respalda la validez de nuestros resultados. Además, tuvimos la oportunidad de analizar los cerebros de 2 mortinatos. Sin embargo, el estado de maceración del tejido cerebral dificultó el análisis debido a las dificultades en la toma de muestras y el procesamiento.

Conclusiones

Esta serie de casos describe la presencia de MP en el OB, principalmente partículas de los polímeros más comúnmente producidos/procesados ​​para ropa y embalajes, como el polipropileno y el nailon. Nuestros datos respaldan la idea de que la vía olfativa es un sitio de entrada importante para los contaminantes ambientales del aire. Teniendo en cuenta los posibles efectos neurotóxicos causados ​​por las MP en el cerebro y la contaminación ambiental generalizada con plásticos, nuestros resultados deberían generar preocupación en el contexto de la creciente prevalencia de enfermedades neurodegenerativas. Se necesitan tecnologías de imágenes no invasivas, como la resonancia magnética, para superar las limitaciones actuales en el análisis de tejidos de diferentes órganos humanos y para mejorar la comprensión de los riesgos para la salud de las MP.

Volver al inicioInformación del artículo

Aceptado para publicación: 22 de agosto de 2024.

Publicado: 16 de septiembre de 2024. doi:10.1001/jamanetworkopen.2024.40018

Acceso abierto: Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la Licencia CC-BY . © 2024 Amato-Lourenço LF et al. JAMA Network Open .

Autor para correspondencia: Luís Fernando Amato-Lourenço, PhD, Freie Universität Berlin – Institut für Biologie, Altensteinstr 6D- 14195 Berlin, Alemania ( luisfamato@zedat.fu-berlin.de ).

Contribuciones de los autores: El Dr. Amato-Lourenço y el Prof. Mauad tuvieron acceso completo a todos los datos del estudio y asumen la responsabilidad de la integridad de los datos y la precisión de su análisis.

Concepto y diseño: Amato-Lourenço, Carvalho-Oliveira, Mauad.

Adquisición, análisis o interpretación de datos: Todos los autores.

Redacción del manuscrito: Amato-Lourenço, Dantas, Carvalho-Oliveira, Mauad.

Revisión crítica del manuscrito en busca de contenido intelectual importante: Amato-Lourenço, Ribeiro Júnior, Ribeiro Paes, S. Rabelo, da Costa, Ando, ​​Freitas, Bispo, Carvalho-Oliveira, Mauad.

Análisis estadístico: Amato-Lourenço, Freitas, Mauad.

Financiamiento obtenido: Amato-Lourenço, Mauad.

Soporte administrativo, técnico o material: Amato-Lourenço, Dantas, Ribeiro Paes, Freitas, Bispo, Carvalho-Oliveira.

Supervisión: Amato-Lourenço, Carvalho-Oliveira, Mauad.

Divulgaciones de conflicto de intereses: No se informó ninguno.

Financiamiento/Apoyo: Este estudio fue financiado por la Fundación Alexander von Humboldt (AvH), Alemania, por la Plastic Soup Foundation, por la subvención 308023/2023-4 del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas (CNPq) y por la subvención 2021/10724-2 de la Agencia de Investigación Pedagógica del Estado de São Paulo (FAPESP).

Rol del financiador/patrocinador: Los financiadores no tuvieron ningún rol en el diseño y conducción del estudio; recopilación, gestión, análisis e interpretación de los datos; preparación, revisión o aprobación del manuscrito; y decisión de enviar el manuscrito para su publicación.

Declaración de intercambio de datos: consulte el Suplemento 2 .

Contribuciones adicionales: Nos gustaría agradecer al personal del Servicio de Verificación de Muertes de la Ciudad de São Paulo (SVOC), a la línea de luz IMBUIA del Laboratorio Brasileño de Luz Sincrotrón (LNLS) por proporcionarnos el tiempo de luz (propuesta n.° 20232740) y el apoyo técnico, a Maria Westerbos y a la Plastic Soup Foundation, al profesor Dr. Lukas Kenner y a la profesora Dra. Verena Pichler por revisar el manuscrito antes de su presentación, y al Dr. Walter Waldman por recomendarnos las instalaciones del LNLS. No recibieron compensación alguna.

Nota: Epicrisis es el órgano oficial de comunicación del Colegio Médico Colombiano. La opinión y conceptos personales expresados en los artículos firmados por un tercero no reflejan la posición de Epicrisis o del Colegio Médico Colombiano-CMC-.

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octubre 7, 2024

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